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紫外分光光度法測(cè)定過(guò)氧化氫含量

更新時(shí)間:2022-01-11      點(diǎn)擊次數(shù):7968

紫外分光光度法測(cè)定過(guò)氧化氫含量

關(guān)鍵詞:分光光度法;過(guò)氧化氫;美析儀器; UV-1500

【原理】

H2O2與硫酸鈦(或氯化鈦)生成過(guò)氧化物—鈦復(fù)合物黃色沉淀,可被HSO4溶解后,在415nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。在一定范圍內(nèi),其顏色深淺與H2O2濃度呈線性關(guān)系。

【儀器和用具】

研缽;移液槍0.2ml和槍頭,5ml×1支;容量瓶10ml×7個(gè),離心管5ml×8支;離心機(jī);UV-1500型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。

【試劑】

100μmol/L H2O2試劑;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸鈦;丙酮;濃氨水。

30% H2O2指的是過(guò)氧化氫溶液的質(zhì)量比,其密度為1.1g/cm3,而過(guò)氧化氫的分子量是34.02,通過(guò)這些參數(shù),我們可以推算出30%的過(guò)氧化氫的摩爾濃度為9.7mol/L.

【方法】

1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:取10ml離心管7支,順序編號(hào),并按表40-1加入試劑。

表40-1  測(cè)定H2O2濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線配置表

試劑(ml)

離  心  管  號(hào)

1

2

3

4

5

6

7

100μmol/L H2O2

0

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

4℃下預(yù)冷丙酮

1.0

0.9

0.8

0.6

0.4

0.2

0

5%硫酸鈦

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

濃氨水

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

 

3000r/min 離心10min,棄去上清夜,留沉淀

2mol 硫酸

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

待沉淀*溶解后,將其小心轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中,并用蒸餾水少量多次沖洗離心管,將洗滌液合并后定容至10ml刻度,415nm波長(zhǎng)下比色。

2.樣品提取和測(cè)定:(1)稱取新鮮植物組織2~5g(視H2O2含量多少而定),按材料與提取劑1∶1的比例加入4℃下預(yù)冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后,轉(zhuǎn)入離心管3000 r/min下離心10min,棄去殘?jiān)锨逡杭礊闃悠诽崛∫骸?2)用移液管吸取樣品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸鈦和濃氨水,待沉淀形成后3000rpm/min離心10min,棄去上清液。沉淀用丙酮反復(fù)洗滌3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗滌后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待*溶解后,與標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法定容并比色。

3.結(jié)果計(jì)算:

植物組織中H2O2含量(μmol/g Fw)=

式中  C—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中H2O2濃度(μmol);

          Vt—樣品提取液總體積(ml);

          V1—測(cè)定時(shí)用樣品提取液體積(ml);

          FW—植物組織鮮重(g)。

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