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紫外可見分光光度計在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用

更新時間:2022-07-05      點擊次數(shù):3381

紫外可見分光光度計在生物學(xué)的應(yīng)用分析中,常見的有蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm,所以,采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的大吸收峰波長280nm 上,測試其吸光度大小,就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。

目前,紫外可見分光光度計的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。它在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。主要的是以下5 個方面。

1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用

主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm,所以,采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的大吸收峰波長280nm 上,測試其吸光度大小,就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。

2. 核酸分析工作中的應(yīng)用

在核酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對核酸的定量檢測;因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到核酸的大吸收峰260nm 上,測試其吸光度大小就是了。

3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用

主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO 到氨基酸的大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小,從而計算出氨基酸的含量。但是,因為氨基酸分析時,一般是將它溶解在水中,而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時,要注意防止干擾的問題。
此外,還需注意:只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收,多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱,測定時要衍生化后再測。

4. 糖類分析測試工作中的應(yīng)用

在糖的分析中, 主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm,所以,對糖類進(jìn)行分析時,只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到氨基酸的大吸收峰218 nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出糖的含量。

5. 多糖分析測試工作中的應(yīng)用

在多糖的分析中,主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將其波長GOTO 到多糖的大吸收峰206 nm 上,就可測試其吸光度大小,從而計算出多糖的含量。

但是多糖的分析難度很大。因為, 在206 nm 處的時候,光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱,儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低,光電倍增管的靈敏度也很低,206nm 左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事,目前許多科學(xué)家正在研究中。

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